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          產(chǎn)品名稱:線粒體檸檬酸含量測(cè)試定試劑盒 微量法

          產(chǎn)品型號(hào):BC2175

          產(chǎn)品報(bào)價(jià):

          產(chǎn)品特點(diǎn):線粒體檸檬酸含量測(cè)試定試劑盒 微量法
          品牌:Solarbio | 貨號(hào):BC2175
          檢測(cè)方法 : 微量法
          規(guī)格:100管/96樣

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          BC2175線粒體檸檬酸含量測(cè)試定試劑盒 微量法的詳細(xì)資料:

                  線粒體檸檬酸含量測(cè)試定試劑盒 微量法

          測(cè)定意義:CA是線粒體三羧酸循環(huán)的*個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。

          測(cè)定原理:CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。

          需要的儀器,耗材:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。 

                    線粒體檸檬酸含量測(cè)試定試劑盒 微量法

          試劑組成和配制:酸性提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。堿性提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 6mL×1 瓶,4℃保存。試劑二:液體 2mL×1 瓶,4℃保存。試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 6mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保存;標(biāo)準(zhǔn)液:液體 1mL×1 支,10μmol/mL 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

                

          線粒體中檸檬酸提取:稱 0.05~0.1g 樣品(建議稱 0.1g 樣本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃ 離心 5min;取上清另一 EP 管中,11000g/min 4℃離心 10min,棄上清(取 300μL 該上清液和 300μL 堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì) CA 含量測(cè)定);沉淀即線粒體,向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液,充分懸浮溶解,超聲波破碎(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),取此溶液 300μL 和 300μL 堿性提取液中和,混勻,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。測(cè)定步驟: 1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 330nm,蒸餾水調(diào)零。 2、試劑一、二和三 37℃預(yù)熱 10min。 3、樣本測(cè)定:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要各做一個(gè)。試劑名稱(μL) 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測(cè)定管試劑一 60 60 60 蒸餾水 60 標(biāo)準(zhǔn)液 60 樣本 60 試劑二 20 20 20 試劑三 60 60 60 充分混勻,330nm 立即測(cè)定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2,ΔA=A2 –A1。檸檬酸含量計(jì)算:(1)按蛋白濃度計(jì)算檸檬酸含量(μmol/mg prot)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(ΔA 測(cè)定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA 空白管) ×V 樣]÷(V 樣÷Cpr)=10×(ΔA 測(cè)定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA 空白管)÷Cpr 蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。(2)按樣本鮮重計(jì)算檸檬酸含量(μ mol/g鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(ΔA測(cè)定管-ΔA空白管)÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA空白管) ×V 樣]÷(W×V 樣÷V 樣總)=10×(ΔA 測(cè)定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA 空白管)÷W C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,10μmol/mL; V 樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積:0.06mL;V 樣總:加入提取液體積:1mL;Cpr:樣品蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。注意:檢測(cè)限為 10nmol/mg prot 或 1μmol/g 鮮重。

           相關(guān)文獻(xiàn):

          《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
           

           

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