糖代謝 β-1,3葡聚糖酶活性檢測試劑盒 

產(chǎn)品名稱: β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒

產(chǎn)品英文名: β-1,3-glucanase （β-1,3-GA）Assay Kit

產(chǎn)品貨號：BC0360      產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣         產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：650
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字: 葡聚糖酶檢測試劑盒|β-1,3-GA檢測試劑盒|葡聚糖酶|試劑盒

簡要介紹：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA 水解昆布多糖，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端，通過測定還原糖生成速率，來計算其酶活性。


產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
  試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入3mL 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；     
試劑二：液體42mL×1 瓶，4℃保存；
  標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，4℃保存，含10mg無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入1mL蒸餾水溶解，配制成10mg/mL葡萄糖溶液備用，4℃可保存1周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間。
標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL。

產(chǎn)品說明：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA 水解昆布多糖，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端，通過測定還原糖生成速率，來計算其酶活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
    細(xì)菌或細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟：

1. 分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長540nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測定（在1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）：

充分混勻，沸水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，540nm 處記錄各管吸光值A，
如果吸光值大于2，可以用提取液對樣本稀釋后測定（計算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)），ΔA=A 測定-A對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。
三、β-1,3-GA 活性計算：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度x（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）和濃度（y，mg/mL）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA帶入公式中計算出樣品中產(chǎn)生的還原糖的含量y值（mg/mL）

1. 按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg 組織蛋白每小時產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

1. 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每小時產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(U/g 鮮重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算
單位的定義：每1萬個細(xì)胞或細(xì)菌每小時產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA(U/10⁴ cell)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，萬。
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糖代謝 β-1,3葡聚糖酶活性檢測試劑盒