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          Hoechst 33258染色液使用說明

          Hoechst 33258染色液使用說明
          貨號:C0020 規(guī)格:10ml/50ml
          保存:-20℃避光保存,一年有效。
          產(chǎn)品簡介:
          Hoechst 33258,也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258,是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33258染色常用于細(xì)胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm,大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長為352nm,大發(fā)射波長為461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色,也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。
          使用說明: 1. 對于固定的細(xì)胞或組織: a. 對于細(xì)胞或組織樣品,固定后,適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色,則行免疫熒光染色,染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33258染色。如果不需要進(jìn)行其它染色,則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33258染色。 b. 對于貼壁細(xì)胞或組織切片,加入少量Hoechst 33258染色液,覆蓋住樣品即可;對于懸浮細(xì)胞,少加入待染色樣品體積3倍的染色液,混勻。室溫放置3-5分鐘。 c. 吸除Hoechst 33258染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。 d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時,會看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染。 2. 對于活細(xì)胞或組織: a. 加入適當(dāng)量Hoechst 33258染色液,必須充分覆蓋住待染色的樣品,通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液,對于96孔板一個孔需加入100微升染色液。 b. 在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度下培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液,用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進(jìn)行熒光檢測。
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