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          一氧化氮(NO)與一氧化氮合成酶(NOS)的檢測


          一氧化氮(NO)




          一氧化氮(NO)是一種極不穩(wěn)定的生物自由基,分子小,結(jié)構(gòu)簡單,常溫下為氣體,微溶于水,具有脂溶性,可快速透過生物膜擴散,是生物體內(nèi)重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,廣泛分布于生物體內(nèi)各組織中,特別是神經(jīng)組織。在機體免疫、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿、生殖等系統(tǒng)中也起著十分重要的作用。


          一氧化氮合成酶(NOS)及其分型




          一氧化氮合成酶(NOS)是生物體內(nèi)催化L-精氨酸合成NO的一類酶,主要存在于血管平滑肌、巨噬細胞、內(nèi)皮細胞、神經(jīng)細胞、肝細胞、腎小球膜細胞等各種細胞中。動物體內(nèi)NOS有3種亞型,分別為神經(jīng)元型NOS(nNOS)、內(nèi)皮型NOS(eNOS)、損傷誘導(dǎo)型NOS(iNOS)。這三種亞型在不同的細胞和組織中有不同的表達模式和功能。

          nNOS主要存在于神經(jīng)系統(tǒng)中,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)表達的nNOS與生物的學(xué)習(xí)、記憶等密切相關(guān),外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)中nNOS產(chǎn)生的NO作為神經(jīng)遞質(zhì)有著調(diào)節(jié)腸道蠕動、舒張血管的作用。eNOS主要存在于血管內(nèi)皮細胞、腎小管內(nèi)皮細胞等,血管內(nèi)皮細胞eNOS產(chǎn)生的NO可抑制血小板聚集和黏附于血管壁,防止出現(xiàn)血栓,還可通過調(diào)控動脈粥樣硬化相關(guān)基因的表達,阻止白細胞向血管壁的遷移和黏附,減少血管炎癥,從而預(yù)防動脈粥樣硬化。iNOS主要存在于與炎癥反應(yīng)相關(guān)的巨噬細胞、白細胞中,通常在細胞中不表達,但可被細菌脂多糖、細胞因子和其他誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)表達,產(chǎn)生大量NO,引起DNA損傷和線粒體呼吸抑制等。


          一氧化氮(NO)含量的檢測




          NO在生物體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2-和NO3-,可通過檢測NO2-和NO3-的含量間接得到NO含量。常見的檢測方法有化學(xué)法與酶法

          化學(xué)法是在酸性條件下,NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進一步與萘基乙烯基二胺偶合,產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰,計算可得樣本NO含量。該法操作簡便,用時較短,方便進行大批量樣本檢測。

          酶法測定總NO含量是利用硝酸還原酶特異性將NO3-還原成NO2-,再與重氮鹽磺酸胺、萘基乙烯基二胺反應(yīng)生成有色產(chǎn)物進行計算。該法檢測靈敏度和準(zhǔn)確性更高,NO含量較低的樣本可用此法檢測。


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