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          首頁 > 技術(shù)文章 > 這些細(xì)胞培養(yǎng)好習(xí)慣和減少污染小細(xì)節(jié),你做到了嗎?
          這些細(xì)胞培養(yǎng)好習(xí)慣和減少污染小細(xì)節(jié),你做到了嗎?

          保證細(xì)胞間的環(huán)境無菌與穩(wěn)定

          01

          首先保證工作環(huán)境干凈整潔,細(xì)胞間每周定期進(jìn)行紫外殺菌,每次30分鐘。細(xì)胞間內(nèi)保持穩(wěn)定的溫度、濕度及換氣。

          02

          細(xì)胞實驗中涉及的儀器,如:離心機(jī)、細(xì)胞計數(shù)儀、倒置顯微鏡、冰箱等盡量放到細(xì)胞間使用,這樣可以保證和環(huán)境一起殺菌,保證儀器干凈整潔,不做其他實驗使用。

          03

          將要使用的耗材提前放到細(xì)胞間內(nèi),減少無關(guān)物品進(jìn)入細(xì)胞間。在實驗過程中減少細(xì)胞間門的開關(guān)次數(shù),保證環(huán)境無菌。

           

          細(xì)胞培養(yǎng)前人和物的無菌準(zhǔn)備

          01

          準(zhǔn)備好純水要高壓滅菌后放到生物安全柜中,用來配制藥品試劑等。

          02

          抗生素提前配好,用過濾器過濾后分裝,放到-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩R部梢灾苯佑脦в锌股氐呐囵B(yǎng)基。

          03

          需要用的血清、胰酶要提前放到4℃冰箱中解凍。血清一般會放到-80℃保存,要逐步解凍,直接放到37℃解凍會出現(xiàn)絮狀物會影響后期使用。

          04

          操作前要把培養(yǎng)基、胰酶放到37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中復(fù)溫,減少低溫對細(xì)胞的刺激。

          05

          將本次實驗需要使用的物品移液器、槍頭、移液管等提前放到生物安全柜中,打開紫外燈滅菌20-30分鐘。

          06

          進(jìn)入細(xì)胞間前要按順序進(jìn)行自身防護(hù),在緩沖間換好、戴好:拖鞋、帽子、口鼻防護(hù)罩、白大衣、手套。拖鞋和白大衣要是細(xì)胞間專用。

           

          細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作的小細(xì)節(jié)

          01

          在操作前,先用酒精給手套消毒;打開生物安全柜,將工作臺用酒精棉球擦拭一遍,等酒精揮發(fā)后,進(jìn)行細(xì)胞實驗操作。

          02

          拿入到安全柜里面的物品都要用酒精噴灑消毒。

          03

          培養(yǎng)基、血清、胰酶等大包裝的試劑一定要進(jìn)行分裝到50mL、15mL離心管中使用,避免污染。如果不小心污染也不會浪費大部分試劑。

          04

          觀察培養(yǎng)箱中的細(xì)胞,用顯微鏡觀察細(xì)胞生長密度、生長狀態(tài),是否染菌。培養(yǎng)基的消耗情況,如出現(xiàn)培養(yǎng)基變黃表示細(xì)胞需要換液,培養(yǎng)基營養(yǎng)耗盡。

          05

          凡是在安全柜中打開的瓶子,用完要及時蓋好,避免污染。在瓶蓋打開過程中,盡量不要從其上方經(jīng)過,避免細(xì)菌掉入。

          06

          做完實驗收拾工作臺,清理垃圾,物品歸位。用酒精擦拭工作臺,打開紫外燈照射20-30分鐘。

           

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